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細胞冷凍保存:保持主要的技巧

更新時間:2026-04-14瀏覽:52次

冷凍保存領域隨著時間的推移而飛躍發展。冷凍解決方案已經過優化和優化,新的開發成果使更長的存儲時間和更好的恢復率成為可能。為了獲得最佳結果,以下是冷凍活細胞或組織時研究人員應遵循的3個關鍵。

像歷史許多其他重大發現一樣,第一種冷凍保存介質是偶然產生的。早在1948年,由Polge,Smith和Parkes組成的研究人員小組研究了家禽的精子,并希望保存一些樣本用于以后的實驗。不確定如何發生,但他們沒有將樣品冷凍在隨后用于保存細胞的溶液中,而是將細胞放在貼標簽的瓶中,該瓶中含有甘油,蛋白和水的混合物。而且這種新混合物遠比預期的解決方案更好,因此誕生了冷凍保存領域。

 

從此,該領域得到了發展,解決方案已經過改進和調整?,F在可以在-20°C或-80°C的溫度下存儲活細胞和組織,而新的開發成果使更長的存儲時間和更好的復蘇率成為可能。此外,還使用-液氮(以液態或蒸氣形式)在-196°C下進行低溫保存,這已成為長期保存的重要條件。

冷凍細胞的三大秘訣

處理冷凍保存的細胞有許多不同的方法,每種方法根據預期用途,保存時間范圍,冰箱的可用性等而有所不同。即使如此,所有冷凍保存方法都有一些共同點,研究人員應遵循這些共同點以取得最佳結果。

1.使用適合細胞的凍存液

 

無論使用“自制"還是商業冷凍介質,請務必使用適合您的細胞或組織的物質。有時,可以在相關論文中找到針對特定細胞類型或應用的優化信息。通過篩選多種配方,您可以找到適合您特定細胞的最佳培養基。解凍后評估細胞的恢復,附著(如果適用)和增殖。大多數細胞冷凍培養基是基于DMSO的(以不同的百分比表示),但也有基于甘油的溶液(通常用于細菌)。如果您有干細胞等敏感細胞,請考慮使用無動物成分的明確培養基,例如Origen的CP-70CE 認證 USP 級凍存液,讓您可以更好地控制細胞的周圍環境,并大大提高凍存和復蘇效率。

 

 

2.注意速度。

冷凍樣品時,重要的是要注意速度。一旦將冷凍培養基添加到細胞中,由于室溫下細胞在DMSO中的暴露量有限,因此應盡可能快地工作。當然,切記不要為了速度而犧牲無菌性和人身安全!另一方面,請勿將小瓶直接放在液氮中或放在冰箱的盒子中。使用“ 允許樣品以每分鐘1°C的速度冷卻的“冰霜"或類似的冷凍容器。放在-80°C的冰箱中過夜,然后將小瓶轉移到液氮中。

 

3選擇正確的存儲位置。

凍存管放在哪里?在液氮內部還是在蒸氣層中?一些研究人員聲稱,氣相層中的存儲效果更好,表明兩相之間的溫差不大,氣相中存儲的細胞不會暴露于潛在的支原體污染,這種污染通過液氮很難消除。

總之,請記住,安全是至關重要的,因此請小心處理凍存管,采取適當的生物安全措施處理冷凍培養基。

 

貨號      產品描述

Cs25  CryoStore 25 EVA 凍存袋

CS25F CryoStore 25 EVA 凍存袋,F型管路

CP-70   USP級DMSO 二甲基亞砜

PL07-2G PermaLife 7ml 透氣性細胞培養袋

PL30-2G  PermaLife 30ml 透氣性細胞培養袋

PL70-2G  PermaLife 70ml 透氣性細胞培養袋

 

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