產品簡介

ProteanFect Max轉染試劑盒是全·球首·款自組裝蛋白納米顆粒核酸轉染試劑，專為原代細胞與難轉細胞系設 計，能夠實現卓·越的外源基因遞送與表達。作為一種非病毒、非電轉、非脂質體的轉染試劑，ProteanFect Max能 高效且低毒性地轉染mRNA、siRNA、DNA 等多種核酸。該試劑操作簡便，僅需 5-15 分鐘即可將核酸遞送至原代 細胞內，最·快在 2 小時內觀察到 mRNA 的表達效果。

試劑盒儲存與成分說明

ProteanFect Max轉染試劑盒在干冰中運輸，收到后應存放于 -20℃到-80℃，直至使用。試劑盒規格依據 Reagent B的體積設定。試劑盒包含陽性對照樣品，編碼綠色熒光蛋白（EGFP）的mRNA和質粒DNA（pDNA）， 以驗證實驗操作及試劑效果。開封后，為確保試劑的最·佳性能，需根據表1中的存儲條件妥善保管各組分。

實驗前材料準備

? 待轉染細胞：轉染前細胞必須處于良好的生長狀態，活率＞90%。細胞在轉染前一天需傳代更換新鮮培養基， 貼壁轉染需提前種板；對于部分原代細胞，建議在適當活化后進行轉染。

? 推薦培養基： Opti-MEM培養基（或無血清的RPMI 1640培養基/無血清DMEM培養基），提前預熱或恢復至室 溫。

? 轉染試劑：室溫自然解凍，顛倒或渦旋至溶液均一后使用。

? 其他：完·全培養基，無菌EP管、所需轉染的核酸樣品。

a, 對于原代細胞，建議在轉染前進行適當的激活處理，以提高轉染效果。 b, 在配置 ProteanFect 轉染體系過程中，如出現輕微粘稠現象，屬正常現象。體系配置完成后建議置于冰上保存；如需在室 溫下保存，須在 30 分鐘內使用完畢。 c, 部分貼壁細胞可通過懸浮轉染方式提升轉染效率，即在轉染當日將細胞消化為單細胞懸液，后續操作流程與懸浮細胞一致。 d, 孵育時間可根據不同細胞類型進行適當調整。對于細胞系，孵育時間建議不超過 2 小時；對于原代細胞，孵育時間建議不 超過 45 分鐘。 e, 陽性對照 mRNA 可在轉染后 5–48 小時內檢測 EGFP 表達；陽性對照 pDNA 可在轉染后 24–48 小時檢測 EGFP 表達； 轉染 siRNA 后敲低效率檢測建議在 48–72 小時內進行。

常見問題：

1.如何提升轉染效率 轉染條件需根據細胞類型和培養條件進行優化。

建議：

1）延長轉染時間：根據細胞狀態適當延長轉染時 間。通常原代細胞不超過1小時，細胞系不超過2小時。

2）提升Reagent C用量：對于細胞系轉染，可在體系中添 加適當的Reagent C，以96孔板為例，添加8-13.5 μL，孵育15分鐘，最長不超過45分鐘；原代細胞則可將 Reagent C體積增加至13.5 μL，孵育時間同樣不超過45分鐘。

3）提升ProteanFect轉染量：適當增加轉染體系至 初始的1.5-2.5倍。

2. 質粒DNA能否用于原代細胞轉染

雙鏈DNA轉染原代細胞可能引起一定的毒性，例如炎癥應激，因此需根據實驗目的謹慎選擇。以人或小鼠 來源的原代T細胞為例，使用質粒DNA轉染可能導致顯著的細胞毒性，因此不適合此類細胞。而大多細胞系通常經 過多代培養，能更有效地應對外源DNA帶來的壓力，對雙鏈DNA轉染的耐受性較高，因此可以使用質粒DNA進行 轉染。

3. 質粒DNA轉染要求

轉染效率受DNA質量影響。建議使用無內毒素試劑盒制備DNA，并確保OD值在1.7-1.9之間；使用無核酸 酶純水將DNA稀釋至0.5-2 µg/µL的濃度。

4. 細胞系轉染前處理

1）為獲得良好的轉染效率，建議使用活性超過90%的細胞，可以通過臺盼藍染色測定細胞活性。2）不建 議使用傳代次數超過15次的細胞進行實驗。

3）新復蘇的細胞在轉染實驗前需傳代2-3次，待細胞恢復正常生長后 使用。

5. 原代細胞轉染前預處理

對于原代細胞，充分活化有助于提高轉染效率，因此建議在適當活化后進行轉染。例如，人原代T細胞可 使用CD3/CD28磁珠或抗體進行激活，激活2-10天內均可轉染，其中激活4-7天時轉染效率高。

6. 關于試劑盒中陽性對照的使用建議

首·次嘗試時，建議設置陽性對照組（EGFP mRNA或EGFP pDNA），以檢測實驗操作和試劑的有效性。 使用96孔板的細胞量即可，節省細胞和試劑。